脑片膜片钳使用手册
一、工作原理：
膜片钳是一种可以直接观察和记录单一离子通道蛋白质分子对相应离子通透难易程度等特性的一种实验技术。其基本原理是用一个尖端光洁，直径约为0.5~2um的玻璃微电极同神经元或者肌细胞的胞膜接触而不刺入，然后在微电极的另一端开口处施以适当的负压，将于电极尖端紧密接触的一小片膜轻度吸入电极尖端的开口内，形成高阻抗的紧密封接，其电阻可达数个吉欧以上。这种封接实际上是把吸附在微电极尖端内开口处的那一片膜同其余部分的胞膜在电化学上完全隔离出来，此时微电极记录到的电流变化只与该膜片中通道分子的功能状态相关。如果该小片膜中只包含了一个或少数几个通道蛋白分子，那么通过微电极测量出的电流就是某种带电离子经由开放的单一通道蛋白分子进行跨膜移动的结果。
二、操作步骤：
1. 打开总电源。
2. 依次打开电脑、显微镜、红外监视器、微操、放大器。
3. 打开Patch Master软件, 在指定盘内建立自己的文件夹。
4. 充灌玻璃电极并排空电极管内的气泡。
5. 安装玻璃微电极，入液，并调至视野可见范围。
6. 点击set-up，并将增益调为0.5；再点Auto,测试电极阻抗。
7. 封接细胞，至吉欧以上，微微提起或吸破细胞膜。
8. 依次点击on-cell,whole-cell补偿。
9. 选定in-out或者whole-cell模式进行实验观察和记录。
10. 实验结束后关闭依次关闭仪器电源，如有进行灌流则需用超纯水反复冲洗灌流槽及管道。
11. 利用超纯水和酒精清洁显微镜镜头。
三、 注意事项：
1.注意实验室卫生，保持地板清洁干燥，每次实验结束后请用清水拖地，防尘、防静电对仪器的损害。
2. 电极拉制仪使用前预热15-30分钟，并且注意安装电极时避免玻璃电极碰触上铂金片。
3. 银丝电极和参比电极发白时，请先用砂纸轻微打磨后，再浸入新鲜的次氯酸钠溶液镀氯化银。
4. 先开放大器及数模转化器，然后打开软件；关机时则，先关软件而后关闭仪器电源。
5. 非必须使用汞灯时，请不要打开汞灯电源，打开后至少需1小时以上后方可关闭。
6. 放大器打开时，禁止直接用手或者其他导电物体接触电极丝，注意静电损害放大器。
7. 向玻璃微电极内灌注内液时切勿灌太多，1~1.5cm为宜，防止液体进入银丝底部，增加噪声。
8. 安装玻璃微电极时，电极应与银丝平行，防止剐蹭银丝电极。
9. 灌流时要时刻注意浴槽内液面高度，防止液体溢出污染显微镜。
10. 浴槽及灌流系统用毕应及时清洗，防止霉菌影响实验。
11. 干燥季节请先用手接触金属框架释放随身静电后再行实验操作。
12. 实验者请在指定的硬盘分区内建立和存储自己的数据及文件。
13. 实验人员在征得管理员同意后，按需设定自己电极拉制及patch模式参数，严禁随意更改实验软件、拉制仪及显微镜的默认设置。