ICP-OES 样品处理

发布者:系统管理员发布时间:2019-09-01浏览次数:0

一、测定细胞离子浓度

1. 预冷的5%葡萄糖等渗溶液洗涤贴壁细胞3次;

2. 加入1ml去离子水,经过-20℃冷冻30min37℃恒温箱15min反复3次的冻融;

3. 细胞刮离反复冻融裂解的细胞内液,收集于EP管中,12700rpm离心15min,取上清,即为细胞内液;

4. 1ml细胞培养基于EP管中,12700rpm离心15min,取上清,即为细胞外液;

5. 细胞内外液上清根据需要用5%HNO3介质进行稀释,并用0.22μm过滤器过滤后样品,备用;

6. Na+K+Ca2+标准品于5%HNO3介质进行稀释,制备标准曲线,

7. 5100 ICP-OES测定样品离子浓度

二、测量细胞中的纳米颗粒含量(以Au纳米颗粒为例)

1.Au纳米颗粒与细胞共孵育一段时间后(12孔板),吸掉每个孔培养基并用PBS缓冲溶液洗三遍,加入200 μL EDTA-胰酶(0.25%),把细胞从孔底上消化下来;

2.200 μL消化下来的细胞溶液,加入400μL王水(王水提前12小时配好),放在37 °C过夜,以彻底消解细胞并分解纳米颗粒成离子;

3. 从中取100 μL的细胞分解液,用1%硝酸的溶液稀释成5 mL,用ICP-OES进行测试,根据标准曲线,计算细胞消解液中金的浓度。

三、测量组织样品中的纳米颗粒含量(以Fe3O4为例)

1. 小鼠心、肝、脾、肺、肾等器官,生理盐水冲洗后置于滤纸上,分别称重后放入标记好的50ml离心管中;

2. 向每管加入10ml浓硝酸并置于摇床上室温消解至组织块全部溶解;

3. 将消解后的组织溶液管放入90℃的水浴锅中,待蒸干溶液后加入5ml去离子水并定容在容量瓶中;

4. 取适量的定容组织溶液于ICP-OES检测Fe含量;

5. 根据消解组织重量计算,小鼠Fe组织分布。